植物灰分中各營(yíng)養(yǎng)元素的測(cè)定

1、植物氮的測(cè)定待測(cè)液制備方法：1.開(kāi)氏消化2.硫酸-雙氧水法測(cè)定方法：1.蒸餾法2.納氏比色法 3.靛酚藍(lán)比色法4.堿解擴(kuò)散法（康惠皿法）5.氨氣敏電極法 6.甲醛法。植物磷的測(cè)定待測(cè)液制備方法： 1.硫酸-雙氧水 2.硫酸-高氯酸。測(cè)定方法：1.鉬藍(lán)比色法 2.鉬黃比色法。植物鉀的測(cè)定待測(cè)液制備方法：1.硫酸-雙氧水 2.硫酸-高氯酸 3.灰化法 4.6M鹽酸浸提法。測(cè)定方法火焰光度法。測(cè)定法精密量取供試品2ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，即為供試品溶液。按火焰光度法（附錄II D）測(cè)定，在769nm波長(zhǎng)處測(cè)定供試品溶液的發(fā)光強(qiáng)度。另精密稱取于110干燥至恒重的氯化鉀0.056g，置5

2、00ml量瓶中，用水稀釋至刻度，再精密量取該溶液1.0ml, 2.0ml, 3.0ml, 4.0ml, 5.0ml,分別置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，制成0.03mmol/l，0.06 mmol/l ，0.09mmol/l，0.12 mmol/l，0.15mmol/l的系列標(biāo)準(zhǔn)鉀溶液，同法操作。用系列標(biāo)準(zhǔn)鉀溶液的濃度對(duì)其相應(yīng)的發(fā)光強(qiáng)度作直線回歸處理，將供試品溶液發(fā)光強(qiáng)度帶入回歸方程，求得供試品溶液鉀離子濃度為（mmol/l），再乘以供試品的稀釋倍數(shù)（25），計(jì)算出供試品鉀離子含量（mmol/l）。植物鈣、鎂的測(cè)定待測(cè)液制備方法：1.硫酸-雙氧水2.硫酸-高氯酸3.灰化法4.硝酸-高氯酸-鹽

3、酸測(cè)定方法：1. AAs法（注意陰離子的干擾）2.ICP法3.EDTA絡(luò)合滴定法。植物硼的測(cè)定待測(cè)液制備方法：灰化法或堿熔法測(cè)定方法：1.甲亞胺比色法2.姜黃素比色法3.鄰二雜菲鎘締合/硝基苯萃取原子吸收法硼的測(cè)定鄰二雜菲鎘締合/硝基苯萃取原子吸收法1、方法原理硼雖可用無(wú)火焰-AAS法測(cè)定，但在石墨爐中易形成碳化硼難于原子化而降低了其測(cè)定的靈敏度。在硫酸的介質(zhì)中，用氟化銨將樣品消解液中的 BO33-轉(zhuǎn)化為BF4-，然后使之與Cd(phen)32+三（1,10含鄰二氮菲）鎘離子締合，反應(yīng)如下：以硝基苯萃取，在空氣-乙炔火焰中，用AAS法測(cè)定鎘的含量從而間接測(cè)定硼的含量。 2、試劑Cd(phen)

4、32+溶液：取2mg/mL Cd2+和5mg/mL鄰二氮菲配成100mL溶液；500mg/L KBF4溶液液和1.25mol/L NH4F溶液；1/15mol/LKH2PO41/15molNa2HPO4緩沖溶液(pH=4.9) 3、操作稱植物樣12g至消化杯，加濃硝酸15mL,高氯酸2mL，穩(wěn)定劑高錳酸鉀0.01g，微波消解制成待測(cè)液。取適量待測(cè)液加1.25mol/L NH4F溶液和濃硫酸各5mL，80加熱30min，置于分液漏斗中，加入pH=4.9緩沖液10mL，搖 1min，加Cd(phen)32+溶液0.7mL充分混合，用硝基苯5mL萃取 3min，取有機(jī)相于228.2nm處AAS測(cè)定鎘

5、，然后計(jì)算硼的含量。3、方法評(píng)述可用MIBK、三氯甲烷或乙酰丙酮等作為萃取劑；對(duì)植物樣品消解處理后的常見(jiàn)離子進(jìn)行實(shí)驗(yàn)表明，因萃取體系控制pH值在5.0左右，Al3+、Fe3+大部分沉淀分離；Na+、K+、Ca2+、Mg2+也不能取代Cd(phen)32+中的 Cd，因而很難進(jìn)入有機(jī)相中；F-、C1-、NO3-、ClO4-、 SO42-、C032-、PO43-等雖有與Cd(phen)32+締合趨勢(shì)，但在萃取條件下，絡(luò)離子的空間構(gòu)型迫使變形性大,不易與Cd(phen)32+締合，或優(yōu)先進(jìn)入有機(jī)相，致使共存離子達(dá)不到干擾。測(cè)定有機(jī)相中的吸光度，硼的特征濃度為0.016?g/mL 1，線性范圍是0.0

6、05-1.20 g/mL。硼的測(cè)定熒光法硼熒光分析多在強(qiáng)酸介質(zhì)或有機(jī)介質(zhì)中進(jìn)行，且靈敏度和選擇性不夠理想，有的反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)、試劑穩(wěn)定性差。方法原理：在近中性的水介質(zhì)中，2-(5-甲基-2-胂酸基苯)偶氮-1,8-二羥基-3,6-萘二磺酸(簡(jiǎn)稱5-MAsA-I)與硼形成在紫外光區(qū)強(qiáng)熒光物質(zhì)，絡(luò)合反應(yīng)時(shí)間短（35min形成），試劑及絡(luò)合物穩(wěn)定時(shí)間長(zhǎng)、選擇性和靈敏度均較好，可直接植物樣品中微量硼的測(cè)定。水定容,于ex=235nm，em =367nm處,測(cè)定溶液的熒光強(qiáng)度。操作步驟在25mL比色管中依次加入0.5mmol/L熒光試劑（5-MAsA-I,水溶液） 2.0mL ，pH6.7的磷酸氫二鈉-磷

7、酸氫二鉀緩沖溶液5.0mL和一定量的標(biāo)準(zhǔn)硼溶液或樣品試液，以二次蒸餾水定容，于 ex= 235nm ，em=367nm處,測(cè)定溶液的熒光強(qiáng)度。測(cè)定的要點(diǎn) 1. 酸度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響：在 pH6.7的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀為反應(yīng)的緩沖介質(zhì)，絡(luò)合物在pH6.37.3范圍內(nèi),熒光強(qiáng)度最大且穩(wěn)定。緩沖劑用量的影響：緩沖劑用量在37mL范圍內(nèi),熒光值基本不變。熒光試劑用量：不足則反應(yīng)不完全, 過(guò)大則熒光猝熄滅，在試驗(yàn)條件下, 在13mL范圍內(nèi)熒光強(qiáng)度基本不變。熒光配合物穩(wěn)定性：35min完成反應(yīng)且至少穩(wěn)定5h。絡(luò)合物組成比為BR=12。線性范圍：02ppm。植物錳的測(cè)定待測(cè)液制備方法：1.灰化法 2.酸

8、溶法。測(cè)定方法：AAs法或ICP法；高錳酸鉀比色法。一、方法原理：在酸性溶液中，加熱煮沸條件下，用強(qiáng)氧化劑將二價(jià)錳氧化為MnO4-，溶液顯紫紅色，在一定范圍內(nèi)顏色深度與錳的含量成正比，可直接比色測(cè)定.反應(yīng):2Mn2+ 5IO4-+ 3H202Mn04+ 5I03-+ 6H+吸收峰在540nm，測(cè)定范圍0.625ppm二、試劑：1KIO4，分析純2H3P04(85),HN03，H2S04，HCl043H20241mol/lNH4OAc(pH7)：冰醋酸57ml，溶于400ml水，加入69ml濃氨水，加水至950ml，用HOAe或NH4OH調(diào)pH7.0(用酸度計(jì))，加水至1000ml;51mol/

9、l中性NH4OAc對(duì)苯二酚溶液：100m11mol/l中性NH4OAc溶液中溶解0.2g對(duì)苯二酚，用前加人。6錳標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.4060gMnS044H20(分析純或優(yōu)級(jí)純)溶于水，加lml濃H2SO4，定容為1000ml，此液含Mn為100ppm.三、儀器：振蕩機(jī)、721分光光度計(jì)。四、操作步驟:(一)樣品待測(cè)液制備：A1、土壤代換態(tài)Mn：取lmm風(fēng)干土樣5.0g三角瓶中，加入1mol/l中性NH4OAc50ml，塞緊，振蕩30分鐘，再放置和間或振蕩6小時(shí)，過(guò)濾，得濾液。取濾液25ml呻100ml燒杯中，小心加熱蒸干，加濃HN032ml，H2022ml，水浴加熱30分鐘，再蒸發(fā)至干，用20ml

10、水溶解，待測(cè)。A2、土壤易還原態(tài)Mn：取1mm風(fēng)干土5.0g，加1mol/l NH40Ac0.2對(duì)苯二酚提取液50ml，同土壤代換態(tài)Mn的操作步驟進(jìn)行。B、植物中的Mn：濕消化：取磨碎的植物樣12g加入開(kāi)氏瓶中，加混合酸(HN03：H2S04：HCl0=5：2：1) 8ml，加熱消化,至冒白煙；如不清，再加少量HCl04消化，至清亮后，再熱5分鐘，冷卻，用20ml水稀釋，冷卻后轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中，用水定容，澄清或過(guò)濾后取濾液測(cè)定，也可以直接將開(kāi)氏瓶中消化液用水轉(zhuǎn)入燒杯中測(cè)定。干灰化法：稱取樣品12g，放人瓷坩堝中，在電爐上炭化至無(wú)煙。移人馬福爐中，5500C灰化至無(wú)黑色。取出加3ml水，加2

11、mll:1HN03溶解灰分，移入50ml容量瓶，水洗凈坩堝，洗液并入容量瓶中，水定容，澄清或過(guò)濾后取溶液測(cè)定。(二)顯色測(cè)定：1在盛有待測(cè)液的燒杯中(如樣品處理時(shí)已轉(zhuǎn)入50ml容量瓶定容，則吸取1025ml溶液或?yàn)V液至lOOml燒杯中進(jìn)行顯色測(cè)定)，加入HN032ml，H3PO55ml.2加入KI040.3g，蓋上表面皿，加熱至沸，小火微沸510分鐘，使顯色，再加水至體積約為40ml，繼續(xù)加熱1520分鐘，使顯色完全，冷卻。3顯色液轉(zhuǎn)入50ml容量瓶，洗凈燒杯，用水定容后，比色測(cè)定，波長(zhǎng)540nm。由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得溶液Mn濃度(ppm)。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別吸取Mn標(biāo)準(zhǔn)溶液(100ppm)0、l

12、、2、3、4、5ml置于lOOml燒杯中，分別加水2015ml，然后同樣晶顯色測(cè)定操作步驟進(jìn)行，所得比色溶液Mn濃度為0、2、4、6、8、lOppm，用Mn濃度(ppm)為橫軸，吸光度A為縱軸，作曲線。五、計(jì)算：土壤Mn(ppm)=(查得ppm×50×50)/(5×25)= ppm×20植物Mn(ppm) = (比色查得ppm×50)/W式中W為植物樣重；如先定容為50ml；再吸取Vml(1025m1)測(cè)定，則計(jì)算式為：(ppm×50×50)/(W×V)土壤易還原態(tài)錳含量應(yīng)將測(cè)定值減去代換態(tài)錳的測(cè)定值。六、注意事項(xiàng)

13、：1測(cè)土壤有效Mn用新鮮土樣為好(同時(shí)測(cè)水份)，因?yàn)橥翗咏?jīng)風(fēng)干，代換Mn含量增加，但對(duì)大批樣及距離分析室遠(yuǎn)的樣品，用鮮樣測(cè)有困難，所以也常用風(fēng)干樣測(cè)。2.植物樣用酸消化時(shí)，消化和溶解都不要用HCl，用HCl04消化最后也要加熱除去C1,C1-會(huì)使MnO4-還原。如用干灰化法處理植物樣，溫度不應(yīng)高于550OC，不能用HCl溶解灰分(可用HN03)，對(duì)含硅多的樣品，少用或不用干灰化處理，避免生成硅酸鹽吸附較多的Mn.3.顯色溶液酸度要求23mol/l，Mn含量低，酸度可稍小些，但不應(yīng)低于1.5mol/l，否則顯色慢，泛黃；Mn含量高時(shí)，酸度也應(yīng)高些，但也不可過(guò)高，不應(yīng)超過(guò)3.5mol/l，否則顏色

14、不穩(wěn)定；易褪色。4.還原物質(zhì)會(huì)與作用而使之褪色,所以待測(cè)液中不應(yīng)有有機(jī)物、Fe2+、Cl-等.土樣浸提溶液要先用和煮沸氧化去除有機(jī)物,氧化、等.因?yàn)閱斡肗H03可能生成Mn02或別的難溶錳鹽，所以要同時(shí)加H202氧化，但多余的H2O2必須，加熱除去，否則H202也會(huì)與KMn04作用而使之還原。5因?yàn)镕e3+有顏色，會(huì)干擾比色測(cè)定，、而且Fe3+會(huì)與IO4-作用生成沉淀，所以加入較多的H3P04與Fe3+絡(luò)合生成無(wú)色的Fe(PO4)23-，避免Fe3+的干擾,H3PO4對(duì)顯色有好的作用，而顯色溶液對(duì)磷酸濃度的要求不嚴(yán)。6，加熱煮沸時(shí)間要充足，使顯色完全，顏色不加深為止?？梢灾蠓袔追昼?，加熱(不沸

15、)30分鐘，所生成的顏色可以長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定。7。KIO4：必須過(guò)量，用質(zhì)量好的(分析純、未受潮的)，否則顯色慢或不易顯色。如果無(wú)KI04，也可用高硫酸銨(NH4)2S208，以AgN03作接觸劑，顯色快，加熱1分鐘即可。8.一般50ml溶液中含Mn 0.1lmg是可以的。如含Mn過(guò)高，應(yīng)將待測(cè)液稀釋定容后，少取一些溶液進(jìn)行測(cè)定。否則在Mn濃度高時(shí)，可能生成高碘酸錳或碘酸錳沉定。植物銅、鋅的測(cè)定待測(cè)液制備方法：灰化法；酸溶法。測(cè)定方法：AAs法或ICP法；植物鉬的測(cè)定待測(cè)液制備方法：灰化法。測(cè)定方法：硫氰酸比色法；極譜法；無(wú)火焰AAs法或ICP法；二甲氧基經(jīng)基苯基熒光酮光度法鉬的測(cè)定二甲氧基羥基苯基

16、熒光酮光度法方法原理：表面活性劑2,3,7三羥基熒光酮類試劑(如水楊基熒光酮、苯基熒光酮、二溴苯基熒光酮、二溴羥基苯基熒光酮、鄰羥基萘基熒光酮等）與鉬形成配合物，其顯色反應(yīng)靈敏度較高，選擇性較好，可用光度法測(cè)定鉬的含量。熒光酮試劑二甲氧基羥基苯基熒光酮(DMHPF)，學(xué)名是2,3,7-三羥基-9(3,5-二甲氧基-4-羥基)苯基熒光酮，其結(jié)構(gòu)式為：并利用Mo6+-DMH-PF-Tritonx-100三元體系，形成與鉬的顯色反應(yīng)，建立了測(cè)定痕量鉬的方法。在硫磷混酸(H2SO4酸度0.04l-0.086mol/L)介質(zhì)中，形成鉬/試劑=1：1的紅色配合物，最大吸收鋒 526nm，表觀摩爾吸光系數(shù)為

17、1.25×10mol/L/cm，鉬含量在0-8g/25m1范圍內(nèi)符合比耳定律。反應(yīng)的選擇性較其他熒光酮試劑有所改善，特別是三價(jià)鐵的允許量可高達(dá)175mg/mL，而且釩、鎢、鈷等的允許量也有所提高。方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，用于樣品中鉬的測(cè)定獲得滿意結(jié)果。儀器與試劑 722型分光光度計(jì)硫磷混酸溶液：分別取硫酸24mL，磷酸80mL，用水稀至500m1。 0.4g/L，稱取DMHPF 0.0400g，加3mol/L H2SO4 7mL，乙醇20m1攪拌溶解，加少許乙醇稀釋移至 100mL容量瓶中，用95乙醇定容。二甲氧基羥基苯基熒光酮（DMH-PF）溶液：50g/L tritonx-100溶

18、液。操作步驟稱取適量植物樣品，加濃HNO3 10ml浸泡24h后低溫消解至劇烈反應(yīng)完畢，再加硝酸-高氯酸混酸 (2：1)10-15mL，蒸至近干，用稀NaOH調(diào)pH近中性后，定容得待測(cè)液。移取一定量待測(cè)液(鉬8g)于25mL容量瓶中，依次加入硫磷混酸溶液2.0mL，50g/L tritonx100溶液5.0m1，DMH-PF溶液2mL，水定容，以試劑空白為參比，用1cm比色皿，于分光光度計(jì) 526nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。方法評(píng)述酸度試驗(yàn)用硝酸、鹽酸、硫酸和磷酸體系，Mo6+-DMH-PF-Tritonx-100 的顯色反應(yīng)均可進(jìn)行，但單獨(dú)使用少量磷酸時(shí)，試劑空白穩(wěn)定性欠佳，20min后溶液顏色加

19、深且出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象。適宜H+為0.07mol/L。顯色時(shí)間及配合物的穩(wěn)定性與DMHPF立即顯色，體系的吸光度即達(dá)最大且恒定，至少24h內(nèi)無(wú)明顯變化。配合物的組成：Mo：DMH-PF1：1。干擾試驗(yàn)當(dāng)測(cè)定誤差不超過(guò)土5%時(shí)，以下離子的允許量(以mg計(jì))為： NO3-(410)，SO42-(250)，F(xiàn)e3+(175)，C1-(150)，K+(55)，Na+、NH4+ (50)，Zn2 +(45)，Cu2+(30)，檸檬酸(25)，酒石酸(20)，Mn2+ (12)， Mg2+、Ni+(10)、A13+(7)、草酸(05)。植物硫的測(cè)定2.2實(shí)驗(yàn)原理植物樣品在充滿氧氣和高溫條件下燃燒，分解出來(lái)的硫被

20、過(guò)氧化氫氧化成硫酸根，在微酸條件下，加起濁劑（BaCl2），硫酸根與鋇離子生成微細(xì)的硫酸鋇膠體微粒懸浮于溶液中，使溶液混濁，其混濁度與溶液中硫酸根的含量成正比，可見(jiàn)光電比色計(jì)進(jìn)行比濁。2.3實(shí)驗(yàn)試劑與儀器實(shí)驗(yàn)試劑  硫酸鈉、氯化鈉、濃鹽酸、甘油、95%的乙醇、氯化鋇、過(guò)氧化氫（以上試劑均為分析純）配制溶液過(guò)程如下: 1.硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.1480g烘干的Na2SO4(AR)移入100mL容量瓶中，加重蒸水至刻度，搖勻，此溶液1.00mL=1.00mg硫酸根。再取25mL此溶液于250mL容量瓶中，并稀釋10倍，即每1.00mL=0.1mg硫酸根。2.穩(wěn)定劑：稱取15g

21、氯化納（AR）溶于60mL水中，加6mL濃鹽酸，17mL甘油和20mL95%的乙醇，混合均勻。3.氯化鋇：篩取80目-100目分析BaCl2晶體，在粗天平上稱取0.2g，包好備用。4.1：4過(guò)氧化氫：1份30%過(guò)氧化氫溶于4份重蒸水中，用時(shí)現(xiàn)配。實(shí)驗(yàn)儀器 1.氧氣鋼瓶及500mL磨口瓶、500ml碘量瓶或具磨口塞的硬質(zhì)三角瓶，特制瓶塞塞下端焊接的白金絲（亦可用6%過(guò)氧化氫淬火3次-4次的鎳鉻絲或電熱絲代替），下端編制成式樣筐。 2.分光光度計(jì)、電磁攪拌器。 3.漏斗、量筒、燒杯、攪拌棒等。實(shí)驗(yàn)樣品采集植物樣品，前處理方法為：洗凈晾干，并于60-70烘箱烘4h，磨碎

22、過(guò)60目篩，放塑料袋備用。實(shí)驗(yàn)步驟標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制按下表制備不同濃度標(biāo)準(zhǔn)列管。表1.標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制以上各管加2.5mL穩(wěn)定劑，用玻璃棒攪勻后，加0.2gBaCl2，在電磁攪拌器上攪拌1min，靜置30min，在分光光度計(jì)上用420nm波長(zhǎng)，1cm比色皿進(jìn)行比濁。然后以光密度為縱坐標(biāo)，已知硫酸根濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 樣品測(cè)定 將定量濾紙剪成4.5cm×5cm的小塊，折好后，稱取0.09g左右試樣于濾紙中央，包折后，緊夾在小筐中，碘量瓶中加重蒸水10mL，過(guò)氧化氫1：4濃度）0.5mL，通氧2min后，點(diǎn)燃濾紙包尾部，立即插入瓶中，輕按瓶塞，將瓶?jī)A斜并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，燃

23、燒完畢后，靜置30min-40min，至瓶?jī)?nèi)無(wú)煙霧時(shí)，打開(kāi)瓶塞，用吸管吸20mL重蒸水沖洗瓶塞、瓶壁及試樣筐，過(guò)濾于100mL小燒杯中，再用17mL重蒸水沖洗碘量瓶，過(guò)濾。在濾液中加2.5mL穩(wěn)定劑，用玻璃棒攪勻后，加0.2gBaCl2，在電磁攪拌器上攪拌1min，靜置30min，在分光光度計(jì)上用420nm波長(zhǎng)，1cm比色皿進(jìn)行比濁，按同法進(jìn)行空白測(cè)定，由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出測(cè)定液中硫酸鹽含量。 注意事項(xiàng) 1.用氧氣鋼瓶通氣時(shí)要注意安全，可在氧氣鋼瓶出口處連接上緩沖瓶，瓶?jī)?nèi)裝水起安全作用。 2.試樣加BaCl2在磁力攪拌器上攪拌時(shí)，要嚴(yán)格控制攪拌速度與時(shí)間，否則對(duì)硫酸鋇

24、顆粒的形成有影響。3.結(jié)果與討論 3.1繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線  由實(shí)驗(yàn)步驟可知，每個(gè)列管中共加入50mL混合溶液，根據(jù)加入標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不同，分別計(jì)算每個(gè)列管中硫酸根含量m，填入下表。  硫酸根濃度為c=m/50，單位是mg/mL，即g/L，分別計(jì)算填入下表。 在分光光度計(jì)上用420nm波長(zhǎng)，1cm比色皿進(jìn)行比濁，測(cè)定每個(gè)列管溶液的光密度，并填入下表。以光密度為縱坐標(biāo)，以硫酸根濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：如上圖，對(duì)所得各數(shù)據(jù)點(diǎn)添加趨勢(shì)線并擬合線性方程得：Y = 8.757X + 0.025，