中藥化學(xué)生物堿3

1、第6節(jié) 生物堿的提取與分離l總生物堿的提取總生物堿的提取l生物堿的分離生物堿的分離l提取分離方法對(duì)生物堿結(jié)構(gòu)的影響提取分離方法對(duì)生物堿結(jié)構(gòu)的影響1.總生物堿的提?。ǎ? 1）生物堿鹽水或酸水提取法）生物堿鹽水或酸水提取法（2 2）生物堿鹽、游離堿醇或酸性醇提取法）生物堿鹽、游離堿醇或酸性醇提取法（3 3）游離堿有機(jī)溶劑提取法）游離堿有機(jī)溶劑提取法（1）生物堿鹽易溶于水）生物堿鹽易溶于水 水或酸水提取法（鹽酸水或酸水提取法（鹽酸 /硫酸硫酸/ 醋酸醋酸 /酒石酸）酒石酸） 浸漬浸漬 /滲漉滲漉/煎煮煎煮 酸水提取液（鹽）酸水提取液（鹽） 酸堿沉淀法酸堿沉淀法a離子交換樹脂法離子交換樹脂法 b有

2、機(jī)溶劑萃取法有機(jī)溶劑萃取法 c總生物堿總生物堿 中藥酸水提取液（鹽）中藥酸水提取液（鹽） 堿化、（鹽析）、過濾堿化、（鹽析）、過濾沉淀沉淀水洗，干燥水洗，干燥總生物堿總生物堿 a.酸堿沉淀法酸堿沉淀法N+OOOCH3OCH3Cl- 鹽酸小檗堿鹽酸小檗堿 (Berberine hydrochloride)中藥酸水提取液（鹽）中藥酸水提取液（鹽） 通過陽(yáng)離子交換樹脂柱通過陽(yáng)離子交換樹脂柱 流出液流出液 （水性雜質(zhì)）（水性雜質(zhì)） 樹脂柱樹脂柱氨液堿化（游離）氨液堿化（游離）氯仿提取氯仿提取 回收溶劑回收溶劑 總生物堿總生物堿 b.離子交換樹脂法離子交換樹脂法一葉c葉嫩莖粗粉0.3%硫酸滲漉滲漉液陽(yáng)離

3、子交換樹脂柱流出液黃色粗品樹脂水洗后用10%氨水堿化堿化的樹脂以乙醚為溶劑索氏提取乙醚液回收乙醚NOO一葉一葉萩萩堿堿 (securinine)中藥酸水提取液（鹽）中藥酸水提取液（鹽） 堿化（氨水、石灰水等）堿化（氨水、石灰水等） 堿水層堿水層 （水性雜質(zhì)）（水性雜質(zhì)） 有機(jī)溶劑層有機(jī)溶劑層 回收溶劑回收溶劑 總生物堿總生物堿 c.有機(jī)溶液萃取法有機(jī)溶液萃取法游離生物堿游離生物堿 親脂性溶劑萃取親脂性溶劑萃取 醇（甲、乙）類溶劑提取法醇（甲、乙）類溶劑提取法 滲漉滲漉/ 浸漬浸漬 /回流回流 醇提取液（鹽醇提取液（鹽 游離）游離） 回收回收 總生物堿總生物堿 酸堿處理酸堿處理d 較純的總生物堿

4、較純的總生物堿 （2）生物堿鹽、游離堿均易溶于醇）生物堿鹽、游離堿均易溶于醇 提取濃縮液（水）或濃縮物提取濃縮液（水）或濃縮物 酸水處理，過濾酸水處理，過濾 不溶物不溶物 （脂溶性雜質(zhì)）（脂溶性雜質(zhì)） 酸水液（鹽）酸水液（鹽） 堿化（游離）堿化（游離）氯仿萃取氯仿萃取 堿水液堿水液 （水溶性雜質(zhì)）（水溶性雜質(zhì)） （水溶性生物堿）（水溶性生物堿） 氯仿液（游離）氯仿液（游離） 回收回收較純的總生物堿較純的總生物堿 d.酸堿處理法酸堿處理法3、游離易溶于有機(jī)溶劑、游離易溶于有機(jī)溶劑 （原料須堿化）（原料須堿化） 親脂性有機(jī)溶劑提取法（苯親脂性有機(jī)溶劑提取法（苯 /二氯甲烷二氯甲烷/ 氯仿）氯仿）

5、冷浸冷浸/ 回流回流 提取液（游離）提取液（游離） 回收回收 總生物堿總生物堿 （3）游離易溶于有機(jī)溶劑）游離易溶于有機(jī)溶劑 （原料須堿化）（原料須堿化） 長(zhǎng)春花全草干粉苯滲漉苯滲漉液6%酒石酸逆相萃取堿水層氯仿層回收氯仿總?cè)跎飰A酸水液氨水調(diào)pH 6-7，氯仿萃取H3CONHNOHNNOHCOOCH3RH3COOC長(zhǎng)春堿RCH3長(zhǎng)春新堿RCHO長(zhǎng)春堿長(zhǎng)春堿(vinblastine)長(zhǎng)春新堿長(zhǎng)春新堿(vincristine)2.生物堿的分離（）（1 1）不同類別生物堿的分離）不同類別生物堿的分離（2 2）生物堿單體的分離）生物堿單體的分離v利用生物堿堿性差異分離利用生物堿堿性差異分離v利用生物

6、堿或生物堿鹽溶解度差異分離利用生物堿或生物堿鹽溶解度差異分離v利用生物堿特殊官能團(tuán)分離利用生物堿特殊官能團(tuán)分離v利用色譜法分離利用色譜法分離（1）不同類別生物堿的分離原理：按生物堿的堿性及是否含有酚羥基分類。原理：按生物堿的堿性及是否含有酚羥基分類?？偵飰A的酸水液（鹽）總生物堿的酸水液（鹽） 氯仿萃取氯仿萃取氯仿層氯仿層（弱堿性）（弱堿性）酸水層酸水層（中強(qiáng)、強(qiáng)堿性）（中強(qiáng)、強(qiáng)堿性）氯仿液氯仿液 （弱堿性生物堿）（弱堿性生物堿） 12%NaOH萃取萃取 堿水液堿水液 CHCl3液液 NH4Cl或或CO2處處理，理，CHCl3萃取萃取 CHCl3液液 回收回收 酚性弱堿性生物堿酚性弱堿性生物堿

7、 回收回收 非酚性弱堿性生物堿非酚性弱堿性生物堿 酸水液酸水液 （強(qiáng)，中強(qiáng)堿性生物堿）（強(qiáng)，中強(qiáng)堿性生物堿） 氨水堿化氨水堿化pH910 CHCl3萃取萃取 CHCl3液液 堿水液堿水液 12%NaOH萃取萃取 雷氏銨鹽沉淀雷氏銨鹽沉淀e有機(jī)溶劑萃取有機(jī)溶劑萃取f離子交換樹脂離子交換樹脂g 水溶性生物堿水溶性生物堿 （強(qiáng)堿）（強(qiáng)堿） 堿水液堿水液 CHCl3液液 NH4Cl或或CO2處處理，理，CHCl3萃取萃取 回收回收 非酚性中強(qiáng)堿非酚性中強(qiáng)堿性生物堿性生物堿 CHCl3液液 回收回收 酚性中強(qiáng)堿性生物堿酚性中強(qiáng)堿性生物堿 堿水液堿水液 用極性有機(jī)溶劑（正丁醇用極性有機(jī)溶劑（正丁醇 /異異

8、戊醇戊醇/氯仿氯仿甲醇）萃取甲醇）萃取 水溶液水溶液 （水溶性雜質(zhì)）（水溶性雜質(zhì)） 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 回收回收 水溶性生物堿水溶性生物堿 有機(jī)溶劑萃取法有機(jī)溶劑萃取法 堿水液堿水液 陽(yáng)離子交換樹脂柱陽(yáng)離子交換樹脂柱游離生物堿游離生物堿堿水洗脫堿水洗脫生物堿鹽生物堿鹽 離子交換樹脂法離子交換樹脂法 酸水洗脫酸水洗脫（2）生物堿單體的分離v利用生物堿堿性差異分離利用生物堿堿性差異分離v利用生物堿或生物堿鹽溶解度差異分離利用生物堿或生物堿鹽溶解度差異分離v利用生物堿特殊官能團(tuán)分離利用生物堿特殊官能團(tuán)分離v利用色譜法分離利用色譜法分離逐步加堿逐步加堿,pH由低至高由低至高分別用分別用CHCl3萃取萃取

9、回收回收CHCl3 混合總生物堿混合總生物堿 酸水溶解酸水溶解 CHCl3溶解溶解 酸水液（鹽）酸水液（鹽） 生物堿生物堿（堿性由弱到強(qiáng)）（堿性由弱到強(qiáng)） CHCl3溶液（游離溶液（游離） 緩沖液萃取緩沖液萃取,pH由高至低由高至低緩沖液分別堿化緩沖液分別堿化CHCl3萃取萃取回收回收CHCl3 生物堿生物堿（堿性由強(qiáng)到弱）（堿性由強(qiáng)到弱） 利用堿性差異分離（pH梯度萃取法）洋金花0.1%鹽酸滲漉滲漉液陽(yáng)離子交換樹脂柱流出液油狀物樹脂水洗至無(wú)色后晾干，用10%碳酸氫鈉混勻以乙醚為溶劑索氏提取乙醚液回收乙醚莨菪堿乙醇液回收乙醚樹脂氨水堿化，乙醇提取氫溴酸東莨菪堿丙酮溶解，40%HBr酸化NHOC

10、OCHC6H5CH2OHCH3NHOCOCHC6H5CH2OHCH3O莨菪堿 pKa 9.65東莨菪堿 pKa 7.50利用溶解度差異分離苦參總堿溶于氯仿，加入10倍量乙醚，過濾沉淀 (氧化苦參堿)濾液 (苦參堿)ONNONNO麻黃草段加8倍量水,浸煮2-3次浸煮液NaOH堿化,pH 11-12,甲苯萃取甲苯萃取液流經(jīng)2%草酸溶液,pH6.5-7草酸溶液減壓濃縮,冷卻過濾結(jié)晶母液草酸麻黃堿草酸偽麻黃堿HHOHNHCH3CH3l-麻黃堿(1R,2S)HOHHNHCH3CH3d-偽麻黃堿(1S,2S)利用特殊官能團(tuán)分離含酚含酚OHOH的生物堿在堿性條件下成鹽溶于的生物堿在堿性條件下成鹽溶于水，可與

11、一般生物堿分離。如嗎啡與可待水，可與一般生物堿分離。如嗎啡與可待因的分離。因的分離。含內(nèi)酯或內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的生物堿在堿性溶液含內(nèi)酯或內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的生物堿在堿性溶液中加熱皂化開環(huán)生成溶于水的羧酸鹽，而中加熱皂化開環(huán)生成溶于水的羧酸鹽，而與其它生物堿分離，加酸后又環(huán)合成原生與其它生物堿分離，加酸后又環(huán)合成原生物堿而沉淀。如喜樹堿。物堿而沉淀。如喜樹堿。 嗎啡和可待因混合物嗎啡和可待因混合物 CHCl3溶解溶解 氯仿溶液氯仿溶液 12% NaOH溶液萃取溶液萃取 堿水液堿水液 CHCl3液液 弱酸酸化弱酸酸化,CHCl3萃取萃取 回收回收 可待因可待因 CHCl3液液 嗎嗎 啡啡回收溶劑回收溶劑 NOCH

12、3HO可待因H3CONOCH3HO嗎啡HONNOOOOHNNCOO-OOOHOH-H+喜樹堿利用色譜法分離吸附柱色譜吸附柱色譜：應(yīng)用廣泛。吸附劑為硅膠、氧化：應(yīng)用廣泛。吸附劑為硅膠、氧化鋁，洗脫劑為以親脂性溶劑為主的混合系統(tǒng)。鋁，洗脫劑為以親脂性溶劑為主的混合系統(tǒng)。如花椒根中如花椒根中6 6種生物堿的分離。種生物堿的分離。分配柱色譜分配柱色譜：適用于極性較大的生物堿或結(jié)構(gòu)：適用于極性較大的生物堿或結(jié)構(gòu)相近的生物堿的分離。如高三尖杉酯堿與三尖相近的生物堿的分離。如高三尖杉酯堿與三尖杉酯堿的分離。杉酯堿的分離。其他色譜法其他色譜法：干柱色譜、中壓或低壓柱色譜、：干柱色譜、中壓或低壓柱色譜、制備薄層

13、色譜、制備薄層色譜、HPLCHPLC等。等?；ń犯?5%乙醇回流提取回收乙醇乙醇提取液氯仿-5%甲醇洗脫部分硅膠柱色譜氯仿、氯仿-甲醇洗脫石油醚洗脫物制備TLC，苯-甲醇展開取黃色熒光帶，甲醇水利部乙醇濃縮液溶于少量甲醇，與硅膠拌勻依次用石油醚、二氯甲烷、甲醇回流氯仿-甲醇(10:1)洗脫部分氧化鋁柱色譜氯仿、氯仿-甲醇洗脫二氯甲烷洗脫物氯仿洗脫部分(1)氯仿洗脫部分(2)硅膠柱色譜苯、苯-甲醇洗脫硅膠柱色譜苯、苯-甲醇洗脫、：8甲氧基白屈菜紅堿：去甲基白屈菜紅堿：花椒朋堿 ：LN乙?；笾A：茵芋堿 ：arnottianamide I花椒根中的生物堿花椒根中的生物堿 (CH2)2C(CH

14、2)2CCOO三尖杉酯堿OCH3OONOHOHH3COOCCH2(CH2)2C(CH2)3CCOOOCH3OONOHOHH3COOCCH2高三尖杉酯堿硅膠分配柱色譜固定相: pH 5.0 緩沖液流動(dòng)相: pH 5.0 緩沖液飽和的氯仿3.提取分離方法對(duì)生物堿結(jié)構(gòu)的影響v溶劑的影響溶劑的影響v酸堿的影響酸堿的影響v色譜分離的影響色譜分離的影響v其他影響其他影響第7節(jié) 生物堿的色譜檢識(shí)l理化檢識(shí)理化檢識(shí) 形態(tài)、顏色、氣味等形態(tài)、顏色、氣味等沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)l色譜檢識(shí)色譜檢識(shí) 薄層色譜薄層色譜紙色譜紙色譜高效液相色譜高效液相色譜氣相色譜氣相色譜1.薄層色譜（1 1）吸附薄層）吸附薄層

15、 適用于分離和檢識(shí)脂溶性生物堿適用于分離和檢識(shí)脂溶性生物堿。v吸附劑：硅膠、氧化鋁。吸附劑：硅膠、氧化鋁。v展開劑：親脂性溶劑為主。一般以氯仿為基本溶劑，根據(jù)展開劑：親脂性溶劑為主。一般以氯仿為基本溶劑，根據(jù)色譜結(jié)果調(diào)整展開劑的極性。加入適量堿性溶劑，分離效色譜結(jié)果調(diào)整展開劑的極性。加入適量堿性溶劑，分離效果較好。果較好。v顯色：有顏色的直接觀察；有熒光的紫外下觀察；多數(shù)用顯色：有顏色的直接觀察；有熒光的紫外下觀察；多數(shù)用改良的碘化鉍鉀試劑顯色（桔紅色斑點(diǎn)）。改良的碘化鉍鉀試劑顯色（桔紅色斑點(diǎn)）。v注意：注意：RfRf太小和復(fù)斑或拖尾時(shí)，可用堿液（太小和復(fù)斑或拖尾時(shí)，可用堿液（0.1-0.5M

16、 NaOH0.1-0.5M NaOH）制板；或用堿性展開劑（少許二乙胺或氨水）；或在層析制板；或用堿性展開劑（少許二乙胺或氨水）；或在層析槽中放一盛有氨水的小器皿。槽中放一盛有氨水的小器皿。（2 2）分配薄層）分配薄層 適用于極性較大或結(jié)構(gòu)相近生物堿的分離。適用于極性較大或結(jié)構(gòu)相近生物堿的分離。 v支持劑：硅膠或纖維素粉。支持劑：硅膠或纖維素粉。v固定相：甲酰胺（脂溶性生物堿）固定相：甲酰胺（脂溶性生物堿） 水（水溶性生物堿）水（水溶性生物堿）v展開劑：對(duì)于脂溶性生物堿，用甲酰胺飽和的親脂展開劑：對(duì)于脂溶性生物堿，用甲酰胺飽和的親脂性有機(jī)溶劑為展開劑，如氯仿苯。對(duì)于水溶性生性有機(jī)溶劑為展開劑，

17、如氯仿苯。對(duì)于水溶性生物堿，以親水性的溶劑為展開劑，如物堿，以親水性的溶劑為展開劑，如BAWBAW（正丁醇正丁醇- -乙酸乙酸- -水水=4:1:5=4:1:5，上層）系統(tǒng)。，上層）系統(tǒng)。v顯色：同吸附薄層。顯色：同吸附薄層。 2.紙色譜適用于水溶性生物堿、生物堿鹽和親脂性生物堿適用于水溶性生物堿、生物堿鹽和親脂性生物堿的分離檢識(shí)。的分離檢識(shí)。v固定相：水、甲酰胺或酸性緩沖液。固定相：水、甲酰胺或酸性緩沖液。v展開劑：水做固定相，以親水性的溶劑為展開劑，展開劑：水做固定相，以親水性的溶劑為展開劑，如如BAWBAW系統(tǒng)，適用于分離生物堿鹽。以甲酰胺或酸性系統(tǒng)，適用于分離生物堿鹽。以甲酰胺或酸性緩

18、沖液為固定相的，多以親脂性溶劑為主的展開系緩沖液為固定相的，多以親脂性溶劑為主的展開系統(tǒng)，使用前用固定相飽和，適用于分離游離堿。統(tǒng)，使用前用固定相飽和，適用于分離游離堿。v顯色劑：同薄層法，含硫酸顯色劑除外。顯色劑：同薄層法，含硫酸顯色劑除外。起始線6.0pH2.03.02.83.23.64.04.45.05.4OCH3H3COH3COOOCH3CH3蓮花寧堿 pKa2.0NOCH3N千金藤堿 pKa 2.8CH3OONH3COOCH3NCH3OCH3表千金藤堿 pKa 4.4H3COOOOCH3原千金藤堿 pKa 2.8CH3NH3COH3COH3CONONCH3H3COH3COH3COCH3OO島藤堿 pKa 5.8千金藤非酚性叔胺堿部分多緩沖紙色譜千金藤非酚性叔胺堿部分多緩沖紙色譜3.高效液相色譜